Nature：AI“造”物主——从一个原子开始，精准设计“生物导弹”，抗体研发迎来新纪元？

大海捞针 的困境：传统抗体发现的 运气 与 蛮力

要理解这项新技术的颠覆性，我们先来看看传统方法的局限性。

想象一下，你是一名军事工程师，任务是摧毁一座敌方碉堡。你知道碉堡的弹药库是其最薄弱的环节，但你不知道弹药库的具体位置。传统的抗体发现就像是给你一万枚普通的炮弹，让你对碉堡进行地毯式轰炸。你发射了成千上万发炮弹，最终有几发碰巧击中了弹药库，任务完成。但这个过程浪费了大量资源，而且成功与否很大程度上依赖运气。你无法保证下一次面对新碉堡时，还能有同样的好运。

这就是免疫动物或文库筛选的真实写照。当我们将一个靶点蛋白（抗原）注射到小鼠体内，它的免疫系统会被激活，产生千千万万种不同的抗体。这些抗体有的结合力强，有的弱；有的打中要害，有的则无关痛痒。研究人员需要通过复杂的筛选技术，像淘金一样，从这片抗体的汪洋中，找到那几颗真正有价值的金子。

更先进的噬菌体展示(phage display)或酵母展示(yeast display)技术，虽然将筛选过程搬到了体外，构建了数以十亿计的庞大抗体库，但其本质依然是 筛选 而非 设计 。它提高了找到 命中者 的概率，但并未解决 精准瞄准 的核心问题。我们依然是在一个巨大的、随机的可能性空间里进行搜索，希望找到能与我们感兴趣的靶点结合的分子。

这种模式的弊端显而易见：

表位不可控：对于许多疾病，只有抑制靶点蛋白的特定区域才能起到治疗效果。例如，阻止病毒与宿主细胞受体结合的位点，或是一个蛋白激酶的活性口袋。传统方法很难保证产生的抗体恰好就结合在这些 黄金表位 上。

效率低下：整个流程，从免疫/建库到筛选、验证，是一个漫长而昂贵的旅程。

免疫盲点：有些重要的靶点表位在结构上与宿主自身的蛋白相似，动物的免疫系统会产生耐受，无法产生有效的抗体。这被称为免疫系统的 盲点 。

多年来，无数研究人员梦想着能摆脱这种 靠天吃饭 的模式。如果能像建筑师设计蓝图一样，事先规划好抗体的每一个细节，它的骨架结构、负责结合的区域（互补决定区，Complementarity-Determining Regions, CDRs），以及它与靶点表位的精确作用方式，那将是怎样一番景象？

AI的 创世之力 ：当RFdiffusion学会了抗体的语言

研究团队所做的，正是将这个梦想照进现实。他们使用的核心工具，是一种被称为 扩散模型 (diffusion model)的深度学习算法。

你或许对扩散模型有所耳闻，近年来火爆的AI绘画工具（如Midjourney, Stable Diffusion）正是基于此。它的工作原理颇具哲学意味：先学习一个物体（比如一张猫的图片）的特征，然后不断地向这张图片添加随机的 噪声 ，直到它变成一片毫无规律的雪花点。这个过程被称为 前向扩散 。接着，AI学习如何从这一片混沌的噪声中，一步步 去噪 ，最终恢复出原始的、清晰的猫的图片。这个逆向过程，就是 生成 。

当AI完全掌握了从噪声到有序结构的秘诀后，它就具备了 创造 的能力。你给它一堆完全随机的噪声，它也能 脑补 并生成一张全新的、世界上从未有过的猫的图片。

研究人员巧妙地将这个思想应用到了蛋白质结构设计上。蛋白质本质上是由氨基酸链折叠成的三维结构。他们将蛋白质的结构信息（原子坐标和方向）视为一幅 3D图像 。RFdiffusion模型通过学习数以万计的真实蛋白质结构，掌握了蛋白质折叠的内在 语法规则 。

然而，通用的蛋白质设计模型并不足以胜任抗体设计这一精细任务。因为抗体的功能核心在于其CDR区，这几个高度可变的环状结构像 手指 一样，需要以极其精确的方式 抓住 抗原的特定表位。通用模型或许能设计出结构稳定的蛋白质，却无法保证这种功能性的、精密的相互作用。

为此，研究人员对RFdiffusion进行了专门的 特训 。他们收集了大量已知的抗体-抗原复合物的晶体结构数据，让模型专注于学习抗体是如何与靶点结合的。在训练中，他们给了模型几个关键的 指令 ：

1. 固定框架：抗体的绝大部分结构是相对稳定的框架区(framework region)，如同导弹的弹体。研究人员将这个框架区的结构作为 条件 输入给模型，让AI在此基础上进行创作，确保生成的是一个 抗体 而不是别的什么蛋白质。

2. 指定表位：研究人员在靶点蛋白上指定了几个关键的氨基酸残基，作为 热点 (hotspot)，告诉AI： 你的任务就是设计出能够与这些点紧密互动的CDR区。

3. 自由创作：在满足以上条件下，模型被赋予了充分的自由度，去生成全新的CDR环的构象，以及整个抗体相对于靶点的最佳结合姿态（即 停靠模式 ，docking mode）。

经过这样的精细调校(fine-tuning)，RFdiffusion从一个通用的 结构画家 ，进化成了一位专业的 抗体设计师 。它学会了抗体世界的语言，理解了CDR与表位之间原子级别的 对话方式 。

从 虚拟 到 现实 ：AI设计的 纳米抗体 首次实战

理论的优美，终须经过实验的检验。研究团队选择了几种与人类疾病密切相关的靶点，作为AI设计师的 毕业考题 。它们包括：艰难梭菌毒素B(Clostridium difficile Toxin B, TcdB)，这是导致严重肠道感染的关键毒素；流感病毒血凝素(influenza haemagglutinin, HA)；呼吸道合胞病毒(RSV)以及(SARS-CoV-2)的受体结合域(RBD)。

他们首先将目光投向了一种结构更简单的抗体，骆驼科动物来源的单域抗体(VHHs)，也常被称为 纳米抗体 (nanobody)。相比于传统抗体拥有重链和轻链两条肽链（共六个CDR区），VHH仅由一条重链可变区构成（三个CDR区），设计难度相对较低，是检验模型能力的理想起点。

AI模型不负所望，针对每个靶点都生成了数千个不同的VHH设计方案。研究人员通过计算筛选后，挑选出数百到数千个最优设计，并通过基因合成技术，在酵母细胞表面展示这些AI设计的VHH蛋白，进行高通量的结合能力筛选。

结果令人振奋。这些完全由AI凭空创造的VHH，在现实世界中表现出了真实的结合活性。

针对流感病毒HA，筛选出的亲和力最高的VHH，其解离常数(Kd)达到了78 nM。这是一个相当不错的结合强度，通常认为nM级别的亲和力已具备成药潜力。

针对艰难梭菌毒素TcdB，最佳VHH的亲和力为262 nM。针对SARS-CoV-2 RBD，也找到了一个亲和力为5.5 M的结合者。

仅仅证明 能结合 还不够，关键在于是否 按预想的方式结合 。研究人员进行了一项巧妙的竞争实验。以TcdB为例，AI设计的VHH的目标表位，是TcdB上一个已知的与人体Frizzled受体结合的区域。研究人员先将一个已知能结合该区域的、非抗体类的小蛋白分子与TcdB结合，当这个 黄金表位 被占据后，他们再加入AI设计的VHH。实验数据显示，此时VHH几乎完全无法结合TcdB。反之亦然。这有力地证明了，AI设计的VHH确实精准地命中了预设的靶点。针对RBD的VHH也通过类似的竞争实验，被证实结合在了正确的表位上。

这些数据清晰地表明，RFdiffusion不仅能设计出会结合的分子，更能设计出在指定位置结合的分子。AI的 设计图纸 在现实世界中得到了成功的 施工 。

眼见为实 的震撼：冷冻电镜下的原子级精确度

如果说结合和竞争实验是令人信服的证据，那么冷冻电子显微镜(Cryo-electron microscopy, Cryo-EM)的结果，则带来了近乎 震撼 的视觉确认。Cryo-EM技术能够以近乎原子的分辨率，直接 看到 蛋白质复合物的三维结构。

研究人员成功解析了AI设计的抗流感病毒VHH(VHH_flu_01)与天然的、带有糖基化修饰的三聚体流感HA蛋白复合物的结构，分辨率高达3.0 。当他们将实验解析出的真实结构与AI最初的计算机设计模型进行比对时，奇迹发生了：

两者惊人地吻合！

整个VHH分子的骨架结构，实验值与设计模型的均方根偏差(Root Mean Square Deviation, RMSD)仅为1.45 。在蛋白质结构领域，低于2 的RMSD通常被认为是高度一致的。

更令人惊叹的是，负责核心结合功能的CDR3环，其RMSD值仅为0.8 ！这意味着，AI不仅预测对了整体构象，甚至连这个最关键、最灵活区域的每一个原子的空间位置都几乎分毫不差。

设计模型中预测的与HA蛋白发生相互作用的几个关键氨基酸侧链（如V100, V101, S103, F108），在真实的结构中，也确实伸向了同样的位置，与靶点形成了预期的相互作用网络。

这幅3D图像所传递的信息是明确的：RFdiffusion的设计精度，已经达到了原子级别。它不是一个模糊的草图，而是一份可以精确到每一个螺丝钉位置的工业级蓝图。

同样，针对TcdB的VHH复合物的结构解析，虽然分辨率稍低，但也明确证实了VHH的结合位点和结合姿态与设计模型高度一致。这进一步证明了该方法的普适性和可靠性。

挑战升级：AI能否驾驭更复杂的 六手连弹 ？

在VHH上取得的巨大成功，鼓舞着研究团队向更宏大的目标迈进：设计标准的、拥有重链和轻链的抗体。这好比一位钢琴家在完美演奏了单手练习曲后，开始挑战需要双手、甚至 六手 （比喻六个CDR区）协同的复杂奏鸣曲。

标准的抗体可变区(scFv或Fab)包含六个CDR环（重链三个，轻链三个），它们必须像六根配合默契的手指，共同抓住抗原。设计的复杂性呈指数级增长。任何一个CDR环的微小失误，都可能导致整个结合功能的丧失。

面对这一挑战，研究人员再次展现了他们的智慧。他们意识到，从头设计一个完美的重-轻链配对非常困难。于是，他们采取了一种 结构引导的组合策略 。

首先，AI针对同一个靶点表位，会生成许多个结构上非常相似、结合模式也几乎一样的设计方案。这些方案可以被归为同一个 结构簇 。理论上，同一个簇里的任何一个重链，都应该能和任何一个轻链很好地 兼容 。

于是，他们不再坚持合成AI设计的固定配对，而是在同一个 结构簇 内，将所有设计的重链和轻链随机组合，构建了一个 智能组合文库 。这种做法极大地增加了找到成功配对的概率，巧妙地绕过了从头设计完美配对的超高难度。

他们将这一策略应用于两个极具挑战性的靶点：一个是前面提到的TcdB的Frizzled结合位点；另一个是临床上极为重要的肿瘤靶点 由PHOX2B蛋白的一个短肽与主要组织相容性复合物(MHC)组成的复合物。后者是开发新型疗法治疗的关键。

实验结果再次验证了这一策略的成功。

他们从针对TcdB的智能组合文库中，筛选到了多个亲和力达到nM级别的scFv分子。其中最优秀的scFv6，亲和力高达72 nM。

更重要的是，对scFv6与TcdB复合物的Cryo-EM结构解析，再次上演了原子级精确度的 神话 。分辨率3.6 的结构显示，这个由两条链、六个CDR组成的复杂分子，其真实的结合模式与AI的设计蓝图（由两个不同的亲本设计拼接而成）完美贴合，整体RMSD仅为0.9 。

六个CDR环的骨架，每一个都达到了惊人的准确度，RMSD值在0.2 到1.1 之间。这表明，RFdiffusion已经具备了同时精确设计多个相互作用环的能力。这是抗体设计领域前所未有的成就。

至此，研究人员已经证明，他们的AI设计平台，无论是面对简单的VHH，还是复杂的scFv，都能够实现从零开始、针对特定表位的、原子级精度的设计。

诚实的 短板 与聪明的 外挂 ：从 能用 到 好用 的进化之路

任何一项突破性的技术在诞生之初，都不可能完美无瑕。该研究最可贵的地方之一，在于它不仅展示了惊人的成功，也坦诚地指出了当前的局限，并提出了巧妙的解决方案。

短板一：初始亲和力有待提高。尽管AI设计的抗体能精准结合，但部分设计的初始亲和力还不够高（例如，一些设计在 M级别），离临床应用的要求还有距离。

对此，研究人员引入了一个强大的 外挂 工具，OrthoRep系统。这是一个巧妙的基因定向进化系统。他们将AI设计的VHH基因置于这个系统中，该系统使用一种 粗心 的DNA聚合酶，在酵母细胞内持续地、高速地引入随机突变，并结合酵母展示技术，不断筛选出亲和力更高的后代。

结果非常理想。经过OrthoRep的 催熟 ，AI设计的VHH的亲和力普遍提升了约两个数量级（100倍），轻松进入了高亲和力的单、双位数nM范围，完全满足了后续成药开发的需求。更重要的是，后续的结构分析证实，这种亲和力的成熟过程，并未改变抗体最初设计的结合模式。这形成了一个完美的 组合拳 ：AI负责精准的 骨架设计 ，定向进化负责高效的 性能优化 。

短板二：实验成功率依然偏低。另一个现实问题是，尽管AI能生成大量设计，但最终通过实验验证能够成功结合的比例并不高（在0%到2%之间）。这意味着研究人员仍需通过高通量筛选，才能从大量 理论可行 的设计中找到 实际有效 的分子。

如何提高这个成功率？关键在于找到一个更强大的 过滤器 ，在实验开始前，就从计算机层面更准确地预测哪些设计最有可能成功。

研究人员回顾他们的工作时，一个更新、更强大的AI工具，AlphaFold3，恰好发布了。AlphaFold3在预测蛋白质相互作用方面展现出了比其前代更强的能力。于是，他们进行了一项 事后诸葛亮 式的回溯性分析：用AlphaFold3去评估他们之前所有的VHH设计。

分析结果提供了一条清晰的前进道路。AlphaFold3对每个设计给出了一个界面预测模板建模评分(ipTM score)，这个分数可以衡量其对复合物结构预测的置信度。研究人员发现，那些实验成功的VHH设计，其AlphaFold3的ipTM分数普遍显著高于失败的设计。他们绘制的受试者工作特征曲线(ROC curve)显示，曲线下面积(AUC)高达0.86，表明ipTM分数是一个非常有效的预测指标。

这意味着什么？如果在未来的研究中，研究人员在合成基因之前，先用AlphaFold3对RFdiffusion生成的设计进行一轮 虚拟筛选 ，只挑选那些ipTM分数高的候选者，那么实验的成功率将有望得到数倍甚至数十倍的提升。

钥匙已被铸造，但门后的世界仍需探索

这项发表在《自然》上的研究，无疑是计算结构生物学和抗体工程领域的一座里程碑。它系统性地构建并验证了一个前所未有的工作流程，使得依据特定功能需求、从原子层面 理性设计 抗体成为可能。

这把由AI铸造的 钥匙 ，为我们打开了一扇通往全新世界的大门。门后的景象，充满了无限的可能性：

速度与成本的革命：传统的抗体发现动辄耗时数年，而计算设计和验证的周期可以被缩短到几个月甚至几周。这将极大地加速新药研发的进程，降低失败风险和研发成本。

攻克 不可成药 靶点：对于那些传统免疫方法难以产生抗体的 免疫盲点 表位，或者病毒上那些为了逃逸免疫而高度保守、但免疫原性不强的关键位点，AI设计提供了一种全新的解决方案。我们可以直接绕过免疫系统的限制，针对这些 软肋 设计武器。

功能的精细定制：除了结合，抗体的功能还包括激活或抑制信号通路、诱导构象变化等。基于结构的精准设计，让我们有能力去创造具有特定调控功能的抗体，而不仅仅是简单的 阻断剂 。

优化成药性：在设计的初始阶段，就可以将溶解度、稳定性、免疫原性等 成药性 相关的参数考虑进去，从源头上避免后续开发中可能出现的种种问题。

当然，我们也要清醒地认识到，这把钥匙刚刚铸成，我们对门后世界的探索才刚刚开始。目前的成功率仍需提升，亲和力的从头设计能力也有待加强，如何让AI设计的CDR序列更接近于人类自身的序列以降低免疫原性，这些都是未来需要解决的重要课题。

但无论如何，一个全新的时代已经拉开序幕。过去，我们是自然的 学徒 ，努力模仿和筛选免疫系统的杰作。而今天，借助AI的强大能力，我们正逐渐成为 设计师 ，开始用自己的智慧和语言，创造出自然界中或许从未存在过的、为解决特定问题而生的生命分子。从一个原子开始，一个由理性设计主导的精准医疗新纪元，正向我们走来。